乙酰輔酶A試劑盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 10管/9樣 25管/24樣 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性:
產(chǎn)品名稱:乙酰輔酶A試劑盒紫外分光光度法
貨號:LZ-S01146-A
規(guī)格 : 10管/9樣 25管/24樣 50管/48樣
測試方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品分類:三羧酸循環(huán)系列
發(fā)貨地:上海
測定意義:
乙酰輔酶A廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔酶A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過這條通路氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰輔酶A是合成脂肪酸,酮體,膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。
測定原理:
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶A和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應,乙酰輔酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應了乙酰輔酶A含量的高低。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 500μL 試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分
裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:液體 20μL×1 支,4℃保存。臨用前加入 500μL 試劑五充分溶解備用;用不完的試
劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1 瓶,-20℃保存。臨用前加入 45mL 試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分
裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑五:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。
臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.92 m L),將試劑二、三和四按
照 1:1:90 的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測定 48 樣);
加樣前置 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴鍋中預熱 30 min;現(xiàn)配現(xiàn)用;
乙酰輔酶 A 的提取
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
生化檢測試劑盒操作步驟:
一、?準備工具和環(huán)境?:確保操作臺面干凈、整潔,這是進行科學實驗的步。南京
?二、?仔細閱讀說明書?:這是使用試劑盒的基礎,說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?:按照說明書的指導,正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本,如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?:將樣本與試劑小心混合,注意輕柔操作,避免產(chǎn)生泡沫,以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?:混合后,耐心等待試劑盒的反應,這個時間可以用來進行其他活動,但不要著急,因為好的結(jié)果值得等待。
六、結(jié)果判讀?:時間到后,仔細判讀結(jié)果。試劑盒通常會有明確的指示,告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來判斷結(jié)果。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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1290元
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